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Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1)[301]

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    产品货号:E-CK-A301

    中文名:线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)

    规格:
    • 20T
    • 50T
    • 100T
    数量:
    - +
    价格: ¥360

    产品简介

    Elabscience®的线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)以JC-1为荧光探针,通过快速灵敏检测线粒体膜电位变化从而检测细胞早期凋亡的试剂盒。

    本试剂盒提供了羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)[E-CK-A301C]作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照试剂。


    检测原理

    线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件,发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体膜电位崩溃,细胞凋亡便不可逆转。

    JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态,两者发射光谱不同。在正常细胞内,线粒体膜电位较高,JC-1聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可产生红色荧光;凋亡早期,线粒体膜电位降低,JC-1不能聚集在线粒体基质中,此时JC-1为单体,可产生绿色荧光。

    通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可检测到细胞膜电位的下降,可将JC-1荧光颜色的转变作为细胞凋亡早期的检测指标。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。

    JC-1单体的最大激发波长为514 nm,最大发射波长为529 nm;JC-1聚合物的最大激发波长为585 nm,最大发射波长为590 nm。实际观察时,常规设置红色荧光和绿色荧光即可。


    试剂盒组成

    产品编号

    成分

    20 T

    50 T

    100 T

    Storage

    E-CK-A301A

      JC-1溶液

    20 μL

    50 μL

    100 μL

    -20°C

    E-CK-A301B

      JC- 1 Assay Buffer (10 ×)

    4 mL

    10 mL

    10 mL× 2

    2~8°C

    E-CK-A301C

      CCCP(10 mM)

    40 μL

    40 μL

    40 μL

    -20°C

    说明书

    一份



    自备试剂

           PBS、去离子水。


    产品使用说明

    1×JC-1 Assay Buffer配制

    JC- 1 Assay Buffer (10 ×)[E-CK-A301B]为10 ×浓缩液,实验前用去离子水稀释成1 ×工作液,2~8°C 保存。

    例如:取100 μL JC- 1 Assay Buffer (10 ×),加入900 μL去离子水,即为1× JC- 1 Assay Buffer。

    JC-1染色工作液配制

    1.  取100 μL JC- 1 Assay Buffer (10 ×) [E-CK-A301B],加入900 μL去离子水,混匀并预热至37°C。

    2.  加入2 μL的JC-1溶液[E-CK-A301A],混匀至充分溶解。配成的溶液即为JC-1染色工作液。

    注:因JC-1在水中的溶解度较小,为促进溶解可37°C 加热。

    阳性对照设置

    1.  CCCP(10 mM)[ E-CK-301C]推荐按照1:1000比例加入细胞培养液中,稀释成10 μM,处理细胞20 min。

    2.  按照实验操作指南进行JC-1线粒体膜电位检测。

    注:对大多数细胞而言,通常10 μM的CCCP处理20 min,线粒体膜电位会完全丧失,JC-1染色后呈绿色荧光,而正常的细胞经JC-1染色后呈红色荧光。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和时间可能有所不同,请参考相关文献确定。

     

    保存条件

    JC-1 Assay Buffer (10 ×) [E-CK-A301B]请 2~8°C 保存,其余试剂保存于-20°C。

    JC-1溶液[E-CK-A301A]需避光保存,避免反复冻融。


    注意事项

    1.  保质期1年。为获得最佳的使用效果,请在3~6个月内使用。

    2.  JC-1在较低温度情况下会有凝固或沉淀,可在20~25°C 水浴至全部溶解后使用。

    3.  对pH变化敏感的细胞建议用胎牛血清代替Assay Buffer孵育染色及洗涤,或延长观测时间。

    4.  荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光。

    5.  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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